Análisis molecular de las deleciones del brazo largo del cromosoma 20 en enfermedad mieloide demarcación de la región común delecionada e identificación de posibles genes supresores

Résumé

La presencia recurrente de deleciones de la banda 12 del brazo largo del cromosoma 20 (de120q12) en un amplio espectro de enfermedades de origen mieloide sugiere que en esta región se situa uno o varios genes supresores, cuya pérdida o inactivación altera la regulación normal de la célula madre hematopoyética. Con el objetivo de estrechar la región común deleccionada en la banda 20q12, e identificar el gen o los genes implicados en el desarrollo de estos procesos hematológicos, hemos analizado 65 líneas celulares derivadas de pacientes con LMA ó LMC en crisis blástica para identificar mutaciones, que puedan suprimir la función de un gen. Dado que la inactivación de los genes supresores a menudo incluye la mutación de un alelo seguida de la pérdida del segundo alelo, analizamos las líneas celulares mediante PCR, en un total de 39 loci localizados en 20q, para la identificación de muestras con un patrón monoalélico. Observamos este patrón, en ocho líneas celulares, las cuales fueron estudiadas mediante FISH y Southern Blots para la identificación de deleciones homozigotas y reordenamientos. Treinta y siete clones de c-DNA previamente caracterizados, fueron hibridados en Southern Blots que contenían ADN de estas líneas celulares sin observar deleciones homozigotas, o reordenamientos intragénicos. El estudio mediante hibridación "in situ", nos permitió identificar en la línea celular CMK tres diferentes reordenamientos, y localizar en dos de los PACs hibridados dos de los puntos de rotura. Esto nos permitió centrarnos en una RCD de 0,7 Mb. Buscando los exones incluidos en los PACs que cubren los puntos de rotura, identificamos 5 genes y el EST sts-T63166. Al analizar su patrón de expresión observamos que TNRC9/CAGF9, h-1(3)mbt, CGI-53 y MYBL2 se expresan en tejido hematopoyético normal (MO), lo que hace suponer que pueden estar implicados en la patofisiología de las enfermedades hematopoyéticas con del 20q