Criopreservación de células CD34+

Resumen

La congelaci]on de precursores hemopoyéticos mediante introducci]on directa en congelador a -80C y utilizaci]on de HES como criopreservante consigue tasas de enfriamiento de 1C/min si se utilizan volúmenes de muestra mayores de 100 ml. El volumen de la suspensi]on celular obtenida tras selecci]on positiva es menor de 5-10 ml. Ante estos volúmenes la congelaci]on no programada es de inaceptable riesgo. HIPOTESIS La inmersi]on de estos hemoderivados con medios de criopreservaci]on libres de HES, en 3 L de metanol homogeneizará la velocidad de enfriamiento (VE) a 1 grado C/min permitiendo la realizaci]on de transplantes hemopoyéticos en condiciones seguras. MATERIAL Y METODOS Tras obtenci]on de las células mediante aféresis de sangre periférica, se purificaron mediante selecci]on positiva con el método de inmunoadsorci]on de biotina-avidina. Se realiz]o un estudio físico en el que mediante introducci]on de un termocoupler en el interior de la muestra se determin]o la VE y la duraci]on de la fase de transici]on para muestras de 2 ml criopreservadas con DMSO y DMSO/HES en 3, 4 L de metanol y sin metanol a -80 grados C para obtener seis tipos de curvas. En segundo lugar se realiz]o un estudio biol]ogico en el que se determin]o si existían diferencias estadísticamente significativas en la recuperaci]on de células, células CD34+ y unidades formadoras de colonias CFU-GM, BFU-E Y CFU-GEMM, entre el método que utiliza HES/DMSO y el método que utiliza DMSO como criopreservante y ambos a su vez congelados con congelaci]on programada y con congelaci]on no programada. RESULTADOS La pureza obtenida con el método de selecci]on fue del 61%, recuperaci]on 89% y enriquecimiento 68 veces. Se demostr]o correlaci]on entre el porcentaje de CD34+ inicial y la pureza obtenida. En el estudio de los parametros de la curva de congelaci]on la muestra congelada con 10% DMSO y 3 L de metanol, obtuvo los resultados más ]optimos con