Caracterización del lipopolisacárido de "Aeromonas" mesófilas

Résumé

El género Aeromonas está constituido por bacilos Gram negativos y comprende patógenos de animales poiquilotermos y oportunistas en humanos. El lipopolisacárido (LPS) es un importante factor de virulencia de Aeromonas hydrophila, por lo que se planteó hallar los genes implicados en la biosíntesis del núcleo del LPS de la cepa AH-3. Con este fin, se aislaron tres mutantes por inserción del transposón mini-Tn5::Km1 con un fenotipo alterado del núcleo, lo que permitió la caracterización de tres regiones wa genómicas distintas. La construcción de mutantes en los genes en los que fue posible y la elucidación de la estructura química de su núcleo mediante ESI MS y el análisis de metilación de los monosacáridos, permitió, junto con el análisis fenotípico del LPS mediante SDS-PAGE y los datos obtenidos a partir de su secuencia y de ensayos de complementación, asignar funciones a cada uno de ellos. Las regiones 2 y 3 wa, constituidas por 4 y 2 genes, respectivamente, codifican las enzimas para la biosíntesis del núcleo interno. La región 1 wa contiene 7 genes que codifican la epimerasa HldD, la ligasa del antígeno O WaaL y las transferasas para la biosíntesis del núcleo externo y la incorporación de la L,D-HepIV. Además, se estudió la distribución de distintos genes del núcleo y se observó su elevada conservación entre diferentes serotipos de Aeromonas mesófilas.Por otro lado, se realizó el análisis y la caracterización funcional de algunos de los genes de la agrupación wb de la cepa AH-3 responsable de la biosíntesis del antígeno O:34, obtenida en un estudio anterior. Consta de 17 genes entre los que se incluyen genes para la biosíntesis de GDP-manosa y dTDP-6-desoxi-L talosa y para la transferencia de sus monosacáridos, para la modificación del antígeno O con acetilaciones, para el inicio de la síntesis de las subunidades O (wecA), su transporte (wzx) y su polimerización (wzy), y para la determinación de la longitud de la cadena (wzz). La región promotora del gen wzz, localizada en función de la determinación de su inicio de transcripción por 5'RACE, presentaba una regulación por temperatura, de manera que el nivel de transcripción/expresión del gen era menor a 37ºC que a 20ºC, según los ensayos de RT-PCR semicuantitativa y de la actividad β-galactosidasa de la fusión transcripcional de la región promotora con el gen indicador lacZ.Este hecho ofrece una explicación a la diferente producción del LPS que presenta la cepa AH-3 a ambas temperaturas.